欧洲药典近二十年来，已先后出了好几版，在2007年版即提到支原体的nat法（即核酸扩增技术，如pcr，荧光定量pcr等）可替代药典传统方法。
欧洲药典强调了对核酸检测方法的验证，包括检测限、特异性和耐用性（robustness）。
在检测限方面，欧洲药典指出，核酸扩增法如替代药典规定的培养法，其检测限需达到10cfu/ml，如替代指示细胞培养法（即dna染色法），检测限需达到100cfu/ml。也可通过核酸拷贝数确定检测限，但应提前建立cfu与核酸拷贝数之间的换算关系。
在特异性方面，欧洲药典规定了nat法应能检测污染细胞的常见的9种支原体，包括：
莱氏无胆甾原体（a. laidlawii）
发酵支原体（m.fermentans）
猪鼻支原体（m. hyorhinis）
口腔支原体（m. oral）
*支原体（m. arginini）
肺炎支原体（m. pneumonia）
鸡毒支原体（m. gallisepticum）
滑液支原体（m. synoviae）
螺原体（spiroplasma citri）
并且，nat法应检查与细菌、哺乳动物dna是否有交叉反应。
在耐用性方面，欧洲药典强调检测结果的稳定性，不受微小波动的影响，因此一般需经多轮测试。每次测试也需要做复孔。
那么，进行方法验证还需要什么呢？标准品？对了。标准品好比一把尺子，能确定你所用的支原体pcr或qpcr检测试剂盒到底是否符合要求。当然，标准品自身也需要标定，这个也是可以检测的。德国mb公司即提供有标定过的10cfu/管和100cfu/管的支原体菌株，其中10cfutm支原体灵敏度套装囊括了以上提到的9种常见支原体，而且这些支原体都是冻干粉型灭活的，不会给实验室带来支原体污染，这一点也令人很放心。
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