一、真菌dna的提取（方法一）
1.实验试剂
（1）dna提取液：0.2m tris-hcl（ph 7.5），0.5m nacl，0.01m edta，1％sds
（2）3m naac
（3）te：10 mmol/l tris-hcl ph8.0，1 mmol/l edta
（4）酚（ph8.0）:氯仿:异戊醇（25:24:1）
（5）氯仿:异戊醇（24:1）
（6）异丙醇
（7）无水乙醇
（8）75%乙醇
（9）rnasea
2.实验步骤
（1）取真菌菌丝0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉
（2）加入4ml提取液，快速振荡混匀
（3）加入等体积的4ml的氯仿:异戊醇（24:1），涡旋3～5min（此处是粗提没有加酚，可以节约成本）
（4）1000rpm，4℃，5min
（5）上清用氯仿:异戊醇（24:1）再抽提一次（10,000rpm，4℃离心5min）
（6）取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇或2.5倍体积的无水乙醇沉淀, 混匀, 静置约30 min
（7）用毛细玻棒挑出絮状沉淀，用75%乙醇反复漂洗数次，再用无水乙醇漂洗1次，吹干，重悬于500ul te中
（8）加入1ul rnasea （10mg/ml），37℃处理1h
（9）用酚（ph8.0）:氯仿:异戊醇（25:24:1）和氯仿:异戊醇（24:1）各抽提1次（10,000rpm，4℃离心5min）
（10）取上清，1/10v 3m naac，2.5v体积的无水乙醇，-70℃沉淀30min以上
（11）沉淀用75%乙醇漂洗，风干，溶于200ul te中，-20℃保存备用
二、真菌dna的提取（方法二）
1.真菌菌丝0.5-1g，在液氮中迅速研磨成粉
2.加入3ml 65℃预热的dna提取缓冲液，快速振荡混匀65℃水浴30min，期间混匀2-3次
3.加入1ml 5m kac，冰浴20min
4.氯仿:异戊醇（24:1）抽提1次（10,000rpm，4℃离心5min）
5.取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇，混匀，静置约30 min
6.用毛细玻棒挑出絮状沉淀，用75%乙醇反复漂洗数次，再用无水乙醇漂洗1次，吹干，重悬于500ul te中
7.加入1ul rnasea（10mg/ml），37℃处理1h
8.用酚（ph8.0）:氯仿:异戊醇（25:24:1）和氯仿:异戊醇（24:1）各抽提1次（10,000rpm，4℃离心5min）
9.取上清，1/10v 3m naac，2.5v体积的无水乙醇，-70℃沉淀30min以上
10.沉淀用75%乙醇漂洗，风干，溶于200ul te中，-20℃保存备用
dna提取缓冲液：100mm tris-hcl（ph8.0），20mm edta（ph8.0），1.5m nacl，2% ctab（w/v），4% pvp40（w/v）和2%巯基乙醇（v/v），pvp和巯基乙醇使用前加入5m kac
方法一和二，是大同小异。主要是dna提取液配方不一样！成本也不一样！
三、真菌菌丝的总rna的提取
1.实验试剂
（1）rna提取缓冲液（ctab）：2% ctab（w/v），2% 聚乙烯吡咯烷酮pvp（w/v），100mm tris-hcl（ph8.0,depc处理的水配置），25mm edta，0.5g/l 亚精胺spermidine，2.0m nacl，2%巯基乙醇（v/v，使用前加入）。由于在高温灭菌条件下，tris-hcl要和depc发生反应，所以配rna提取缓冲液时直接用depc处理的水配制即可
（2）sste：1 m nacl，0.5% sds（w/v），10mm tris-hcl ph8.0，1.0mm edta
（3）10m licl 直接用蒸馏水配10m licl，加1‰的depc过夜后，高温灭菌
（4）3m naac
（5）氯仿:异戊醇（24:1）
（6）酚（ph4.5）:氯仿:异戊醇（25:24:1）
（7）depc处理水 用1‰的depc处理蒸馏水过夜，高温灭菌
（8）无水乙醇；70%酒精
2.实验步骤
（1）实验开始前将rna提取液于65℃水浴锅中预热，离心管中加入me（巯基乙醇），（10ml加80ul，50ml中加入300ul）
（2）取约0.8g菌丝体（液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了），在液氮中迅速磨成精细粉末，装入50ml离心管，按1g材料8ml的量加入预热的rna提取液，颠倒混匀
（3）65℃水浴3-10 min，期间混匀2-3次
（4）加入等体积的酚（注意是酸酚ph4.5）:氯仿:异戊醇（25:24:1）抽提（10,000rpm，4℃，5 min）
（5）取上清，等体积的氯仿:异戊醇（24:1）抽提（10,000rpm，4℃，5 min）
（6）加入1/4v体积10m licl溶液，4℃放置6h以上（或过夜）
（7）10,000rpm，4℃离心20min
（8）弃上清，用500ul sste溶解沉淀
（9）酚:氯仿:异戊醇（25:24:1）抽提两次，氯仿:异戊醇（24:1）抽提1次（10,000rpm，4℃，5min）
（10）加2v体积的无水乙醇，在-70℃冰箱沉淀30min以上
（11）12,000rpm，4℃离心20 min
（12）弃上清。沉淀用70%酒精漂洗一次，干燥
（13）加200ul的depc处理水溶解
（14）用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测rna的质量
（在抽提过程中，若蛋白质含量或其它的杂质还较多，可以增加抽提次数）
注意：提取rna请尽量在低温下操作，如果条件不容许，在室温下操作的时间要尽可能的短。
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