详细的原代细胞培养经验

发布时间:2024-02-17
01原代细胞启蒙老师的重要性
一般进实验室都有师兄师姐带着做,他们就是你做细胞的启蒙老师。他们的操作手法、细节、理论讲解就成了你操作的准则,如营养液、细胞瓶的摆放位置;灭菌处理程序;开盖手法;细胞吹打手法等等。要学会他们的正确操作,在*次的时候就要重视。
02
像养孩子一样养细胞
细胞真的很脆弱,每天都去看看它,以防止出现培养箱缺水、缺二氧化碳、停电、温度不够等异常现象,也好及时解决这些意外,避免重复实验带来的更大痛苦。
03
好细胞要及时保种
细胞要分批传代,这样即使有一批出了问题,还有一批备用的。像后者一般人可能不容易做到。但这是我血的教训,有一次细胞污染了,全军覆没。当时可后悔没有保种。
04每种细胞都有自己的特性,要区别对待
细胞跟人一样,不同的细胞,培养特性是不一样的。培养过程中要细细体会。不同细胞株使用不同的培养基和血清。
05
无菌意识要强
实验进行前,超净台以紫外灯照射 30 分钟灭菌,以 70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面,并开启超净工作台风扇运转数分钟后,才开始实验操作。
每次操作只处理一株细胞株,以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后,将实验物品带出工作台,以 70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。
无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞,必要物品,例如支架、吸管等公用物品可以暂时放置,其它个人实验用品用完应立即拿出。实验用品以 70% 乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域,一般勿在边缘区域操作。
小心取用无菌之实验物品,避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口,亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后,以手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约 45° 角取用,尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
06选择正确的培养基
不同的原代细胞可能培养基不同,甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞,有文献就选用 neurobase 培养基,而我的实验目的主要是做抗氧化和氧化方面的,而这种培养基中含有抗氧化剂成分,此时,我就不得不选择另外一种不含抗氧化剂的培养基。
产品名称: anti-brdu 规格: 0.1ml 溴脱氧尿苷单克隆抗体
产品名称: anti-brdu 规格: 0.1ml 溴脱氧尿苷抗体
产品名称: anti-brg1 规格: 0.1ml 新的抑癌基因brg1抗体
产品名称: anti-brucella 规格: 0.1ml 抗布鲁氏菌抗体
产品名称: anti-bsep 规格: 0.1ml 胆汁酸盐输出泵蛋白抗体
产品名称: anti-btg2/tis21 规格: 0.1ml b细胞迁移基因2抗体
产品名称: anti-btk 规格: 0.1ml 鼠抗人非受体型酪氨酸激酶btk单克隆抗体
产品名称: anti-c 规格: 0.1ml 过敏毒素c(补体c)抗体
产品名称: anti-c 规格: 0.2ml 过敏毒素c抗体
产品名称: anti-ca ⅱ 规格: 0.1ml 碳酸酐酶2抗体
原代细胞
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