在液相色谱柱的使用过程中,大家总是碰到这样那样的问题。今天给大家介绍几个常见的问题及解决方法。
1.使用一段时间后柱压过高:
解决方法:
首先查看是否hplc系统原因,排除系统原因后,原因基本是由于实验过程中杂质在柱中的累积。尽量完善操作条件,做完样品后要及时冲洗干净,如缓冲盐的流动相一定要用高比例的水溶液(如,90%)冲洗后再用有机相保存。
2.筛板堵塞与柱头塌陷:
解决方法:
如确定是色谱柱头的过滤筛板被污染,可以将色谱柱反方向用甲醇冲洗至正常压力,或者卸下色谱柱头,小心取下筛板,用5%左右的硝酸溶液超声处理20分钟左右,再用纯水超声20分钟左右,重新装入色谱柱。
3.色谱柱头的填料被样品污染:
解决方法:
如确定色谱柱头的填料被污染,将柱头螺丝卸下,挖出柱内前段被污染的填料,用相同的柱填料重新填入,仔细修复后,重新安装上柱头螺丝。
4.色谱柱内缓冲液中的盐遇到高浓度的甲醇或其他有机溶剂,形成结晶析出:
解决方法:
如确定是盐结晶,用10%的甲醇/水冲洗色谱柱使柱内盐全部溶解,再换高浓度甲醇。