麻疹病毒RT-LAMP试剂盒​使用方法

发布时间:2024-05-25
麻疹病毒rt-lamp试剂盒使用方法:
一、稀释pcr阳性对照(以10e2-10e7拷贝/μl这6个10倍稀释度为例)
1. 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的dna片段作为阳性对照。
2. 标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
3. 用带芯枪头分别加入45 μl荧光pcr专用模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4. 在7号管中加入5 μl 1×10e8拷贝/μl 的阳性对照,充分震荡1分钟,得1×10e7拷贝/μl的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头,在6号管中加入5 μl 1×10e7拷贝/μl 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10e6拷贝/μl的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头,在5号管中加入5 μl 1×10e6拷贝/μl的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×10e5拷贝/μl的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品dna的制备
8. 如果有n个样品,必须设置n+2个提取,多出的一个是pc(样品制备阳性对照),一个是nc(样品制备阴性对照)。可以用10μl上步制备的pcr阳性对照的第4号(浓度为1×10e4 拷贝/μl,10μl相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×10e5 拷贝/μl,10μl相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为pc。另外用水作为nc。如果每次制备需要200μl样品,则pc和nc的体积也必须是200μl。
9. 用自选方法纯化样品的dna,本试剂盒跟市场上大多数病毒dna提取试剂盒兼容。
三、设置qpcr反应(20 μl体系,在样品制备室进行)
10. 如果只做1次重复,则标记n+9个pcr管,其中n+2个用于上步得到的n+2个样品,1个用于pcr阴性对照,6个用于pcr阳性对照。如果做2-3次重复,则反应设置数量相应增加2或3倍。
11. 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加)
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