禽白血病/肉瘤病毒pcr检测试剂盒注意事项:
1.pcr反应应该在一个没有dna污染的干净环境中进行。设立一个的pcr实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.pcr试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.pcr的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
实验要点:
1.ctab 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2.在适条件下,dna—ctab 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的dna 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使dna 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到dna. —ctab 沉淀。
3.虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能*抑制rna 酶的活性,而且酚可以溶解含poly(a)的mrna。如果用苯酚的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的,的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pbs 的dh5α菌种接种在lb 固体培养基(含50μg/ml amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml lb 液体培养基(含50μg/ml amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒dna 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得dna 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。