线粒体蛋白提取试剂盒(蛋白组实验、质谱适用)的应用！
一、背景
线粒体蛋白提取试剂盒(蛋白组实验、质谱适用)适用于从各种原代或传代动物细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织中提取总蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。
试剂盒含有的配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
试剂盒的蛋白提取组份中不含有不可透析除去的去垢剂组份，不含sds、triton x-100、chaps等可能影响质谱实验的组份，最后得到的蛋白质样品经过透析或者脱盐处理后将不含有去垢剂、高浓度盐等影响，基本可以满足下游任意的蛋白质组学相关研究。
二、使用方法
1、收集细胞，在4℃，2000g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干。
2、用冷pbs洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3、每5×106-1×107个细胞(大约50mg细胞/50μl细胞压积)中加入500μl冷的总蛋白提取液，吹打混匀后，在4℃条件下振荡20-30分钟，至细胞充分裂解，无明显细胞沉淀。
4、在4℃，12000g条件下离心15分钟。
5、将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到细胞总蛋白。
6、将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或用于下游实验。
7、将蛋白样品透析处理或者脱盐柱脱盐处理后用于下游实验。
三、应用
用于茭白线粒体蛋白双向电泳体系建立研究：
建立适合于茭白线粒体蛋白质组分析的双向电泳技术体系,为进一步开展茭白线粒体差异蛋白质组学研究提供参考。
方法：以茭白为试验材料,比较不同线粒体提取纯化方法、ipg胶条p h范围及蛋白上样量等条件对双向电泳图谱的影响。
结果：差速离心（300014000×g）联合percoll不连续密度梯度离心（20%∶24%∶40%=2∶4∶2）对茭白线粒体的提取纯化效果优于仅采用差速离心。
采用改良酚抽法提取茭白线粒体蛋白,17 cm、p h 310的ipg胶条,1.0 mg上样量,12%sds-page进行双向电泳,0.12%考马斯亮蓝g-250胶体考染法染色,茭白线粒体蛋白主要分布在p h 48范围内,p h 34和p h 810范围内蛋白点较少;
进一步选用p h 47和p h 58的ipg胶条对茭白线粒体蛋白进行双向电泳,分离效果均明显提高,且p h 47范围内ipg胶条的双向电泳图谱清晰,蛋白点分辨率较高。
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