dapi染色原理及使用说明
dapi是一种能够与dna强力结合的荧光染料。它结合到双链dna小沟的at碱基对处，一个dapi分子可以占据三个碱基对的位置。结合到双链dna上dapi分子的荧光强度提高大约20倍，常用与荧光显微镜观测，根据荧光的强度可以确定dna的量。另外，因为dapi可以透过完整的细胞膜，它可以用于活细胞和固定细胞的染色。在荧光显微镜观察下，dapi染剂是利用紫外光波长的光线激发。单独dapi的最大吸收波长为340nm，最大发射波长为488nm；当dapi与双链dna结合时，最大吸收波长为364nm，最大发射波长为454nm（10 mm tris ph7.0，100 mm nacl，10 mm edta），其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。dapi也可以和rna结合，但产生的荧光强度只有与dna结合的荧光强度的1/5，其发散光的波长范围约在500nm左右。
使用说明（仅供参考）
1.配制工作液：用双蒸水或pbs稀释母液，配制成所需要的工作的浓度（0.5-10μg/ml），工作液可于4℃保存6个月。
2.固定的细胞或组织染色：对于固定的细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。dapi染色通常在其他染色的最后进行。如果不需要进行其它染色，则直接进行dapi染色。
a）对于贴壁细胞或组织切片：加入适量dapi染色液，覆盖住样品即可。
对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。
b）吸除dapi染色液，用tbst、pbs或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。
c）直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长360nm，发射波长460nm。
3.活细胞或组织染色：
a）细胞培养物中加入适量dapi染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。通常对于六孔板一个孔需加入1ml染色液，对于96孔板一个孔需加入100μl染色液。
b）在37℃培养细胞10～20分钟。
c）用pbs或合适的缓冲液洗细胞两次。
d）直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长360nm，发射波长460nm。
关键词：显微镜 荧光显微镜