1. 用pbs液漂洗盖玻片的原代细胞3次，每次30s；
2. 在室温中用3%甲醛/pbs固定20min；
3. 用pbs液再漂洗3次，每次1min，后用滤纸吸干多余的pbs液；
4. 投入冷丙酮中（-10—-20℃）7min；
5. 用pbs漂洗3次，每次1min，后用滤纸吸干多余的pbs液；
6. 向直径6cm的干净碟皿*滴一滴浓度为0.1—0.2mg/ml的一级抗微管蛋白抗体，令小盖片细胞面向下扣在抗体液上，覆以皿盖，于37℃生化培养箱中放置45min—1h；
7. 向碟皿内匀速缓慢滴加pbs，令盖片浮起在液面，用镊子夹出，按步骤3处理；
8. 向干净碟皿*滴一滴浓度为0.1—0.2mg/ml的荧光标记的二抗，其后操作按步骤6进行；
9. 按步骤7和3操作；
10. 滴ph8.5的90%的甘油/pbs少许于载玻片上，把小盖片的原代细胞面覆在大盖片上；
11. 将盖片置于荧光显微镜下观察；