在建立elisa试剂盒批发方法作反应动力学研究时，实验表明，两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时，产物的生成可达。为加速反应，可提高反应的温度，有些试验在43℃进行，但不宜采用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为*，在放射免疫测定中多使反应在冰箱中，以形成多的沉淀。但因所需时间太长，在elisa试剂盒中一般不予采用。
保温的方式除有的elisa试剂盒仪器附有特制的电热块外，一般均采用水浴，可将elisa试剂盒板置于水浴箱中，elisa板底应贴着水面，使温度迅速平衡。为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此时可让反应板漂浮在水面上。
若用保温箱，elisa试剂盒板应放在湿盒内，湿盒要选用传热性良好的材料如金属等，在盒底垫湿的纱布，后将elisa试剂盒板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规定的温度，特别是在气温较低的时候更应如此。无论是水浴还是湿盒温育，反应板均不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡。室温温育的反应，操作时的室温应严格限制在规定的范围内，标准室温温度是指20-25℃，但具体操作时可根据说明书的要求控制温育。室温温育时，elisa试剂盒板只要平置于操作台上即可。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。为保证这一点，一个人操作时，一次不宜多于两块板同时测定。