n-乙酰基-β-葡萄糖苷酶（nag）活性检测试剂盒（微量法）
产品货号：ba1935
产品规格：100t/48s
产品简介：
n-乙酰-β-d-葡萄糖苷酶（ec 3.2.1.52，n-acetyl-β-d-glucosidase，nag）广泛分布于各种组织中，是一种细胞内溶体酶，测定nag活性可用于肾小管间质性肾炎、尿路感染、糖尿病肾病综合症、高血压肾病、肾移植后的排异反应和肾病综合症的早期诊断。
nag分解n-β-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定400nm下吸光度的 变化来计算nag活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品组成：
试剂名称
规格
保存条件
提取液
液体60ml×1瓶
2-8℃
试剂一
液体10ml×1瓶
2-8℃
试剂二
粉剂×1瓶
-20℃
试剂三
液体20ml×1瓶
2-8℃
标准品
液体1ml×1支
2-8℃
溶液的配制：
1.试剂二：临用前取一瓶加入2ml蒸馏水溶解备用；可-20℃分装保存4周，避免反复冻融；
2.标准品：5μmol/ml的对硝基苯酚溶液。临用前用蒸馏水将标准品稀释8倍得0.625μmol/ml的标准溶液。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、ep管。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1.组织：按照组织质量（g）:提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取0.1g组织，加入1ml提取液），冰浴匀浆。15000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.细菌、细胞：按照细胞数量104个：提取液体积（ml）500~1000:1的比例，建议500万细胞加入1ml提取液），超声波破碎细胞（冰浴，功率200w，超声3s，间隔7s，总时间3min），然后15000g，4℃，离心10min，取上清，置冰上待测。
3.血清（浆）等液体：直接测定。
二、测定步骤
1.分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。
2.操作表 (在1.5ml离心管中依次加入下列试剂) ：
试剂名称（μl）
测定管
对照管
标准管
空白管
试剂一
60
60
60
60
试剂二
30
-
-
-
37℃下预热5min
-
-
蒸馏水
-
30
30
40
标准液
-
-
10
-
样本
10
10
-
-
37℃反应30min
-
-
试剂三
200
200
200
200
混匀后室温放置2min，吸取200μl于微量玻璃比色皿或者96孔板中测定400nm的吸光度，分别记为a测定管、a对照管、a标准管、a空白管。计算δa测定=a测定管-a对照管，δa标准=a标准管-a空白管。
三、nag活性计算
1.按蛋白浓度计算
活力单位定义：每mg蛋白在反应体系中每分钟生成1nmol对硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
nag (u/mg prot) =δa测定÷（δa标准÷c标）×1000×v样÷（cpr×v样）÷t=20.83×δa测定÷δa标准÷cpr
2.按样本质量计算
活力单位定义：每g样本在反应体系中每分钟生成1nmol对硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
nag (u/g 质量)=δa测定÷（δa标准÷c标）×1000×v样÷(v样÷v样总×w)÷t=20.83×δa测定÷δa标准÷w
3.按细胞数量计算
活力单位定义：每104个细胞在反应体系中每分钟生成1nmol对硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
nag (u/104cell)= δa测定÷（δa标准÷c标）×1000×v样÷（细胞数量×v样÷v样总）÷t
=20.83×δa测定÷δa标准÷细胞数量
4.按液体体积计算
活力单位定义：每毫升液体在反应体系中每分钟催化生成1nmol对硝基苯酚为一个酶活力单位。
nag (u/ml)= δa测定÷（δa标准÷c标）×1000×v样÷v样÷t=20.83×δa测定÷δa标准
c标：标准溶液浓度：0.625μmol/ml；v样：加入的样本体积，1ml；v样总：提取液体积，0.01ml；cpr：上清液蛋白浓度，mg/ml；t：反应时间，30min；细胞数量：以万计；w：样本质量，g；1000：换算系数， 1μmol=1000nmol。
注意事项：
吸光度若大于2时，建议将样本用提取液稀释后进行测定。