摘要：建立了高效液相色谱串联质谱法测定牛奶中*浓度的方法。方法采用3通道mrm模式对*进行检测，一个通道用于定性，两个用于定量。分析方法的定量下限为0.02 ppb，定量线性范围为0.02 ppb-1.0 ppb，r2 = 0.9980，权重为1/x。
前言：*(cap)是一种广谱抗生素，早使用于1949年。*虽然价格便宜,但因其副作用大，故已不作为治疗人类疾病的一线药物[2,3] 。据报道，*能抑制骨髓细胞的生长，导致非再生性贫血和可能致命的再生障碍性贫血。此外，*是一种有效的非竞争性的微粒体酶抑制剂，能影响其它药物的吸收代谢。*也可当兽药应用,但由于它对人类有许多潜在的副作用，所以在许多被限制或禁止使用。欧盟2003/181/ec 决议规定在牛奶中被检出任何水平的*都是不允许的，同时规定检测*的方法必须符合或优于0.3 ppb的低要求 [4] 。
实验样品制备*（cap），纯度98%，购自sigma-aldrich；*-d5 (d5-cap)，(溶于乙腈，浓度为100 μg/ml)，由剑桥大学同位素实验室提供。空白牛奶基质根据cronly等人报道的方法制得[5] ：在2 ml 的离心管中加 0.5 g 全奶(购买于当地超市)和1 ml 乙腈，混合，涡旋30 s；再加入0.25 gnacl，振荡30 s, 然后在12000 转速下离心10 min，上层有机相转移至另外一个离心管并置于eppendorf真空干燥器内45 °c干燥。后用0.5 ml的初始流动相（甲醇/水=10/90）复溶，并用0.2 μm pvdf 过滤针过滤，终得空白牛奶基质。不同浓度的*和0.3 ppb（在基质中）的内标d5-cap逐个加入到一定量空白牛奶基质中。
色谱条件： • 色谱柱：ace® c18, 50x2.1 mm, 3 μm • 进样体积：10 μl • 流速：0.5 ml/min • 流动相a：水 • 流动相b：甲醇 • 梯度： • 0.00 min 10% b • 0.05 min 10% b • 2.50 min 95% b • 3.00 min 95% b • 3.10 min 10% b • 4.50 min 10% b 质谱条件： • 真空隔层加热电喷雾源（vip-hesi）加热温度：400 °c • 加热气体流量：70 unit • 雾化气流量：90 unit • 锥孔气温度：250 °c • 锥孔气流量：10 unit • 喷雾电压：-4500 v • 主动排空: 开 • 标准分辨率 • 转换时间：100 ms • cap 和d5-cap 检测离子： • m/z 320.9>152 (ce:12 v) 定量 • m/z 320.9>257 (ce: 8 v) 定性 • m/z 320.9>194 (ce:10 v) 定性 • m/z 326>152 (ce:12 v)内标
实验结果图2显示的是空白牛奶基质中加入低浓度0.02 ppb cap (上样量为200 fg）的离子流色谱图。在这色谱图中可以观察到有一个微弱的背景信号干扰。然而，这基质干扰峰响应值远小于低浓度信号强度，0.02 ppb的cap可以清晰的检测到。图3显示的是0.02 ppb cap（上样量为200 fg）在空白牛奶基质中三个选择离子监测离子通道mrm的色谱图，它们的s/n都大于10。
结论建立了一种简单，快速测定牛奶中*浓度的高效液相串联质谱法。利用可以对牛奶基质中浓度低至 0.02 ppb的*进行准确定性和定量分析。