日本同仁ck04 cck-8试剂盒
日本同仁ck04 cck-8试剂盒，产品简介：
产品品牌：同仁
产品名称：cck-8试剂盒
英文名称：cell counting kit-8
产品货号：ck04
产品规格：500t
日本同仁ck04 cck-8试剂盒，产品说明：
cell counting kit-8 简称cck-8试剂盒，为mtt法的替代方法，是一种基于wst（水溶性四唑盐，化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2h-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。可用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏等试验
使用说明：
一、制作标准曲线（测定细胞具体数量时）
1
、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
2
、按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。
3
、接种后培养至细胞贴壁，然后加cck-8试剂培养一定时间后测定od 值，制作出一条以细胞数量为横坐标（x 轴），od 值为纵坐标（y 轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入cck-8后的培养时间。）
二、细胞活性检测
1
、在96孔板中接种细胞悬液（100μl/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（在37℃,5% co2的条件下）。
2
、向每孔加入10μl cck-8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响od值的读数）。3
、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。4
、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。5
、如果暂时不测定od值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10μl 0.1m的hcl或者1%sds(w/v)溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。
三、细胞增值-毒性检测1
、在96孔板中配置100 μl 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时（在37 ℃，5% co2的条件下）。2
、向培养板加入10μl不同浓度的待测物质。在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。3
、向每孔加入10 μl cck-8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响od值的读数）。如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加cck-8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。4
、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。5
、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。6
、如果暂时不测定od 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10μl 0.1m的hcl或者1%sds(w/v)溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。
活力计算：.
细胞活力（％）=[a(加药)－a(空白)]／[ a(0加药)－a(空白)]×100a
（加药）：具有细胞、cck-8溶液和药物溶液的孔的吸光度a
（空白）：具有培养基和cck-8溶液而没有细胞的孔的吸光度a
（0 加药）：具有细胞、cck-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力
注意事项：
①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入cck-8试剂后的培养时间。
②白细胞可能需要培养较长时间。
③当使用标准96 孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1 ,000个/孔 (100 μl培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 ( 100 μl培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10% 加入cck-8溶液。
④如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490 nm 之间的滤光片，但是450nm检测灵敏度最高。
⑤培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。
cck-8
法与其它检测方法之间的比较：
细胞计数方法 mtt法 xtt 法 wst-1 法 cck-8法
形成的formazan 的水溶性 差 好 好 好
产品性状 粉末 2 瓶溶液 溶液 1瓶溶液
使用方法 配成溶液后使用 现配现用 无需预制 无需预制
检测灵敏度 高 很高 很高 高
检测时间 较长 较短 较短 最短
检测波长 560-600nm 420-480nm 420-480nm 430-490nm
细胞毒性 高，细胞形态wanquan消失 很低，细胞形态不变 很低，细胞形态不变 很低，细胞形态不变
试剂稳定性 一般 较差 一般 很好
大批量样品检测 可以 非常适合 非常适合 非常适合
便捷程度 一般 便捷 便捷 非常便捷