一、pcr是什么
聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的dna（或rna）片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊dna复制，pcr的最大特点，是能将微量的dna大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的dna，就能用pcr加以放大，进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。
pcr(聚合酶链式反应）是利用dna在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°c左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至dna聚合酶最适反应温度（72°c左右），dna聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的pcr仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。
二、pcr原理
基本反应原理
从专业的角度来说，pcr 由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：
1模板 dna 的变性：模板 dna 经加热至 94℃ 左右一定时间后，使模板 dna 双链或经 pcr 扩增形成的双链 dna 解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应做准备；
2模板 dna 与引物的退火 （复性）：模板 dna 经加热变性成单链后，温度降至 55℃ 左右，引物与模板 dna 单链的互补序列配对结合；
3引物的延伸：dna 模板--引物结合物在 taq 酶的作用下，以 dntp 为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板 dna 链互补的半保留复制链。
重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的「半保留复制链」，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需 2～4 分钟， 2～3 小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
三、pcr的基本反应步骤
1.引物的设计：
引物需要自己查找文献或者自己设计，然后交给合适的生物公司来帮我们合成，合成引物，每管装1od。拿到引物后需要加水溶解，但是因为引物是看不见的，所以为了防止溶解过程中引物的丢失，拿到引物后最好先高速离心（10000rpm, 4°c离心2min）再进行加水溶解（ddh2o）。水的体积按引物浓度稀释100倍，溶解好的引物用小管分装，每管装50μl即可，分装后放-20°c保存。
2.制作模板：
模板的制作可以直接借助试剂盒，一般情况下trizol的试剂可以需要，直接按照试剂盒提示来做就可以了。
3.建立体系、上机：
pcr需要用到的dna聚合酶、buffer、dntps。而经常用的dna聚合酶有taq酶，买的同时会附送10×buffer(主要成分是kcl、tris-hcl和mgcl2，有些还有(nh4)2so4)。做pcr之前要提醒大家一点，不是所有的pcr都用同样的反应体系的，也就是说pcr体系里用到的试剂除了10×taq buffer以外，其它其实都是需要摸条件的，但是按大多数情况来说，需要调整的并不多，可能需要调整的主要试剂是mgcl2（其实是要调整mg2+的浓度）；可能需要控制的条件主要是退火温度。
4.跑胶验证：
在电泳之前，需要进行凝胶的配制，凝胶液配制的过程并不复杂，先用天平称取适量的琼脂糖粉末，加入到一定体积的1×tae（tris、乙酸、edta）缓冲液中，微波炉加热至沸腾，拿出来摇匀，帮助粉末溶解，反复沸腾多次直到粉末溶解。待溶液不烫手，将核酸染料加入溶液中摇匀，接着将溶液趁热倒到做胶的凝胶板上，插上梳子（用来预留加样孔），等半小时左右胶凝固拔下梳子，连胶带板一起放到电泳槽中，加电泳液至淹没整块凝胶（电泳槽中的电泳液也用1×tae缓冲液）。然后将loading buffer与样品混合，加入到凝胶小空（“梳子”形成的洞）中，dna maker作为对照，同样加入到筛孔中，然后插上电源开始跑胶就可以了，凝胶上有颜色的有两条带，等到前面的蓝色带跑到整块胶的2/3处停止电泳（断电），然后把胶拿出来，放到紫外光下观察条带。