细胞：h1688细胞
中文名称：人小细胞肺癌细胞
生长特性：贴壁细胞
来源：atcc细胞库
培养基：1640培养基 血清：10%fbs（gibco胎牛血清）
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细胞常规培养传代流程（ 请严格遵照无菌操作）
1． 吸出原培养瓶中的培养基，pbs 缓冲液润洗细胞两次，加 2-3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意把握消化时间，通常控制在 1-2min）
2． 镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉yi酶，加 6~8ml 培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散。
3． 取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。
4． 注意培养基 ph 值变化情况，定期换液（每周 2-3 次），待细胞密度达到 80%以后重复 1 项操作或者冻存。
（adv）核酸扩增检测：
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10,000rpm离心10s，向设定的n个pcr反应管中分别加入26μl，向每管中加入处理后样品(所获得的cdna样品)或adv–阳性质控品(使用前用阴性质控品梯度稀释10倍、100倍、1000倍，记为1×10p6pcopies/ml，1×10p5pcopies/ml，1×10p4pcopies/ml)和阴性质控品4μl，10,000rpm瞬时离心30秒。将各反应管放入定量pcr仪器的反应槽内，按对应顺序设置阴性控品，阳性定量标准品以及未知标本，并设置反应体积(30μl)、样品名称、标记荧光基团种类(报告基团为fam，淬灭基团为tamra)和循环条件：
abi prism 7700，abi prism5700，abi geneamp 7000 (需要剪掉反应盖)，abi prism7300/7500(使用8联管)，mj opticon(使用8联管)等使用薄壁管的仪器，循环条件：94℃→2分钟，后93℃ 30秒→55℃ 45秒， 40个循环。
lightcycler等使用毛细管的仪器，循环条件：94℃→2分钟，后93℃ 5秒→56℃ 45秒，共40个循环。
结果分析判定:
反应结束后保存检测数据文件。根据分析后图像调节baseline的start值（3-8），stop值（13-18）以及threshold值，使std curve 窗口下的标准曲线达到最佳（correlation数值介于-0.97~-1之间，correlation数值等同于∣r∣值），最后到reporter窗口下记录仪器自动分析计算出的未知标本数值（qty-copies/ml）。
关键词：培养箱