液相色谱仪建立等度洗脱方法的主要步骤如下：
1选择基本色谱条件：
色谱柱：15mm×4.6mm或25mm×4.6mm，c8或c18反相填料，5μm粒度。
流动相：水-乙腈（5~99%）b可变。
梯度时间为：25min（2ml/min）到50min（1ml/min）。
2调整梯度范围
尽可能减少分离开始和结束时的时间浪费（没有色谱峰只走基线。
3调整分离度
如果色谱图有很多峰分离度不好，可以延长tg，要延长天g可以增加柱长，减小填料的颗粒度，降低流动相速度。调节tg、流动相速度和柱尺寸来保持平均容量因子值。
4调节峰容量
调节到色谱图中能容纳所有的峰，改变流速以便使峰与峰的距离合适
5如果要进一步改变峰间距，就改变有机溶剂的成分。
6如果样品的相对分子质量大于500，就按s比例增加tg。s可按下面数据进行估计：
样品相对分子质量
s
样品相对分子质量
s
100
1000
4
10
10000
100000
30
100
关键词：液相色谱仪 色谱柱