红色荧光蛋白hcred1(应用于亚细胞标记)
hcred1是从紫点海葵heteractis crispa分离出来的,已经商业化应用。hcred1来自于通过突变改造可以吸收红光的非荧光生色蛋白,改造后可以产生微弱的荧光二聚体,最大吸收值在588nm,最大发射光为618nm。虽然这个蛋白的荧光发射谱可以与dsred分开,但是它易于跟dsred共凝集,亮度也不够。将两个分子纵列起来改造hcred原则上可以克服二聚化,但是两个分子配对更易于产生单体标签。
较为常用的荧光蛋白是绿色荧光蛋白(gfp)。将gfp编码序列与目的蛋白编码序列融合构成融合基因后,通过基因枪法、显微注射法、电转化等细胞转染技术,转染合适的细胞。利用目的基因的基因表达调控机制,如启动子和信号序列来调控融合基因的表达,通过荧光显微镜观察gfp在组织或亚细胞中的分布即可确定目的蛋白在细胞中的定位。
目的基因与gfp基因的融合有两种方式∶①gfp位于目的基因后面,即目的基因-gfp;②gfp位于目的基因前面,即gfp-目的基因。构建方式的选择要视具体蛋白具体分析,不能影响目的蛋白的定位和功能。
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以上资料来自小编msq,2023.09.28
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