dna定量是dna样品制备过程中的一项重要工作，helixyte 绿色双链dna定量检测试剂盒提供了一种用helixyte green br快速测定dsdna的方法。该测定法在三个数量级上是线性的，并且比紫外线吸收度读数灵敏度高几个数量级。helixyte green-br与dsdna结合后荧光增强，序列依赖性小，可准确测定基因组dna、病毒dna、miniprep-dna或pcr扩增产物等多种来源的dna样品。该方法对rna上的双链dna（dsdna）具有高度的选择性，并且被优化以测量从10 pg/ul到10 ng/ul的dna浓度。
适用仪器
荧光酶标仪
ex:490 nm
em：530 nm
cutoff：510 nm
推荐孔板:纯黑色孔板
实验方案
样品实验方案
简要概述
1.准备dsdna标准品，测试样品和染料工作溶液
2.添加dna标准液或测试样品（50 ul）
3.添加helixyte green-br工作溶液（50 ul）
4.在室温下孵育2分钟
5.检测ex / em = 490/530 nm的荧光强度
提示：操作前将所有组件加热到室温。暂时没有关于helixyte green dsdna染色剂的致突变性或毒性的数据。由于该试剂与核酸结合，因此应将其视为潜在的诱变剂，应谨慎处理。dmso储备溶液应特别小心，因为已知dmso有助于有机分子进入组织。
溶液配制
标准溶液配制
将100 ul的100 ug / ml dsdna标准溶液（组分c）添加到400 ul的测定缓冲液（组分b）中，以生成20 ug / ml的dsdna标准溶液。然后用测定缓冲液（组分b）进行1：3的系列稀释，以得到0至20 ug / ml的系列稀释的dsdna标准品。
工作溶液配制
helixyte green br工作溶液：将50 ul helixyte green br（组分a）添加到5 ml的测定缓冲液（组分b）中，使总体积为5.050 ml。通过用箔纸覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。注意：我们建议在塑料容器中而不是玻璃中制备该溶液，因为染料可能会吸附到玻璃表面。为了获得结果，应在准备后的几个小时内使用此溶液。
实验步骤
表1.在透明底部96孔微孔板中的dsdna标准品和测试样品的布局。ds = dsdna标准品（ds1-ds7，20至0.027 ug / ml）;bl =空白对照；ts =测试样品
bl
bl
ts
ts
ds1
ds1
…
…
ds2
ds2
…
…
ds3
ds3
ds4
ds4
ds5
ds5
ds6
ds6
ds7
ds7
表2.每个孔的试剂组成
well
volume
reagent
ds1-ds7
50 ul
连续稀释 (20 to 0.027 ug/ml)
bl
50 ul
缓冲液 (component b)
ts
50 ul
实验样品
1.根据表1和表2提供的布局，制备dsdna标准品（ds）、空白对照品（bl）和测试样品（ts）。对于384孔板，每孔使用25 ul试剂，而不是50 ul。注：根据需要处理细胞或组织样本。
2.添加50 ul helixyte green-br染料工作液（2x）分别加入dsdna标准液、空白对照液和供试品中，使总分析体积为100ul/孔。对于384孔板，添加25 ul的helixyte green-br染料工作溶液，每孔总体积为50 ul/孔。
3.在室温下避光培养2分钟。
4.在ex/em=490/530 nm（截止=515nm）处用荧光酶标仪检测荧光强度。
图示
图1.用helixyte green dsdna定量试剂盒在96孔黑色孔板中测量了dsdna剂量反应。
关键词：荧光酶标仪 酶标仪