一.百萤 链霉亲和素-xtra if488缀合物概述
链霉亲和素缀合物广泛用于和biotin缀合物结合以检测多种生物靶标，例如蛋白质，核酸和其他分子。它们被用作许多生物检测的理想选择，例如免疫荧光显微镜，流式细胞术，蛋白质印迹和其他生物应用，因为链霉亲和素具有很强的亲和力结合biotin，在广泛的ph和温度范围内都不会受到影响。aat bioquest®提供多种标记有经典荧光染料的链霉亲和素偶联物（例如：fitc，tritc，texasred®，cy3®，cy5®和cy7®），以及我们优异的水溶性，光稳定性ifluor 和mfluor 染料。然而，常规的biotin-亲和素检测系统仍然受到现有荧光缀合物有限信号强度的限制。链霉亲和素xtra ifluor缀合物是超亮链霉亲和素缀合物的新家族，其激发和发射性能与alexa fluor荧光团几乎相同，信号增强了3到5倍。它是在细胞成像或流式细胞仪中检测低丰度靶标的一组强大工具。ifluor 488是fitc通道成像中常见的绿色荧光色之一。
二.百萤 链霉亲和素-xtra if488缀合物参数
ex(nm) 491
em(nm) 516
分子量 ~52000
溶剂 water
存储条件 在-15℃以下保存，避光防潮
三.百萤 链霉亲和素-xtra if488缀合物适用仪器
流式细胞仪
ex: 488nm
em: 530/30nm
通道: fitc通道
荧光显微镜
ex: fitc滤波片组
em: fitc滤波片组
通道: 黑色透明底板
四.百萤 链霉亲和素-xtra if488缀合物实验方案
溶液配制
1.储备溶液配制
所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°c下。 避免重复冻融循环。
链霉亲和素-xtra 储备溶液（1 mg / ml）：加入100 ul的cat＃46000和1 ml的cat＃46001的ddh2o，制成1mg/ml的储备溶液。注意：此重组溶液在4°c储存并避光保存后，可稳定保存6个月而无明显变化。为了更长的存储时间，可以将重构的溶液分成单次使用的等分试样，或者不分装添加等体积的甘油（浓度为50％），然后将溶液存储在-20°c（避光）。
2.工作溶液配制
链霉亲和素-xtra 工作溶液：对于if，建议的染色浓度为1-5 ug / ml。对于facs，建议在染色浓度为0.1-0.5 ug / 100 ul /百万细胞。注意： pbs + 0.1％bsa可用作染色缓冲液。 注意：为了获得每种应用的性能，需要仔细确定该试剂的浓度。注意：建议的工作稀释度仅供参考，建议用户在测试中使用适当的阳性和阴性对照对产品进行滴定。
样品示例及操作
1.按照说明书中的建议用目标抗体封闭和处理样品。
2.在样品中以适当的浓度和持续时间添加biotin偶联的二抗工作溶液。注意：请验证您的biotin偶联抗体与实验中使用的一抗的相容性和类型。例如，如果一抗是小鼠抗体，则与biotin结合的山羊抗小鼠抗体可用于该测定。
3.在室温下用链霉亲和素-xtra 工作溶液孵育细胞30分钟至1小时。注意：孵育的时间需要仔细确定。
4.取出工作溶液，然后将细胞重悬在缓冲液中。
5.使用荧光显微镜拍摄图像或使用流式细胞仪记录强度。
图示：
图1.用链霉亲和素-xtra ifluor 缀合物和链霉亲和素alexa fluor 缀合物染色的hela细胞图像对比。hela细胞用4％多聚甲醛固定30分钟，用0.02％triton x-100透化10分钟，并用1％bsa封闭1小时。然后将固定的hela细胞在室温下用1 µg / mlα微管蛋白小鼠单克隆抗体染色1小时，然后用gxm igg-biotin（cat#16729）染色，然后用streptavidin-xtra ifluor 488和streptavidin-alexa fluor 488染色.细胞核用hoechst 33342（蓝色，cat#17535）染色。
关键词：荧光显微镜 流式细胞仪 显微镜