实验试剂
采用t7• tag affinity purification kit
t7•tag抗体琼脂。b/w缓冲液：4.29mm na2hpo4，1.47 mm kh2po4，2.7 mm kcl， 0.137mm nacl，1%吐温-20，ph7.3 洗脱缓冲液: 0.1m柠檬酸，ph2.2. 中和缓冲液：2m tris，ph10.4。 peg 20000。
实验步骤
1.100ml 含重组表达质粒的菌体诱导后，离心5000g×5min，弃上清，收获菌体，用10ml预冷的b/w缓冲液重悬。
2. 重悬液于冰上超声处理，直至样品不再粘稠，4℃离心 14000g×30min，取上清液，0.45μm膜抽滤后作为样品液。
3. 将结合t7•tag抗体的琼脂充分悬起，平衡至室温，装入层析柱中。
4. b/w缓冲液平衡后样品液过柱。
5. 10ml b/w缓冲液过柱，洗去未结合蛋白。
6. 用5ml洗脱缓冲液过柱，每次1ml，洗脱液用含150μl中和缓冲液的离心管收集，混匀后置于冰上，直接sds-page分析。
7. 将洗脱下来的蛋白放入透析袋中，双蒸水透析24hr，中间换液数次。
8. 用peg 20000浓缩蛋白。
注意事项
蛋白在过层析柱前，要0.45μm膜抽滤，否则几次纯化后，柱子中会有不溶物。