由于细菌各自的酶系统不同，新陈代谢的产物也有所不同，而这些产物又各具有不同的生物化学特性。为此，可利用生物化学的方法来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的细菌，这种试验称为细菌的生化反应试验。
1、在培养物中加入某种底物与指示剂，经接种、培养后，观察培养基的ph值变化。
2、在培养物中加入试剂，观察它们同细菌代谢产物所生成的颜色反应。
3、根据酶作用的反应特性，测定酶的存在。
4、根据细菌对理化条件和药品的敏感性，观察细菌的生长情况。
生化试验的注意事项
1、待检菌应是新鲜培养物。培养18-24h。
2、待检菌应是纯种培养物。
3、遵守观察反应的时间。观察结果的时间，多为24或48小时。
4、应做必要的对照试验。
5、提高阳性检出率，至少挑取2-3个待检的疑似菌落分别进行试验。
生化试验分类
（一）糖类代谢试验
（二）氨基酸和蛋白质代谢试验
（三）有机酸盐和铵盐代谢试验
（四）酶类试验