问题1：培养液ph值变化太快
可能原因
(1)co2张力不对
(2)培养瓶盖拧得太紧
(3)nahco3缓冲系统缓冲力不足
(4)培养液中盐浓度不正确
(5)细菌、酵母或真菌污染
建议解决方法
(1)按培养液中nahco3浓度增加或减少培养箱内co2浓度，2.0g/l到3.7g/l浓度nahco3对应co2浓度为5%到10%。
(2)松开瓶盖1/4圈。
(3)改用不依赖co2培养液。加hepes缓冲液至10到25mm终浓度。
(4)在co2培养环境中改用基于earle′s盐配制的培养液，在大气培养环境中培养改用hanks盐配制的培养液。
(5)丢弃培养物，或用抗生素除菌。
问题2：培养液出现沉淀，但ph值不变
可能原因
(1)洗涤剂清洗后残留有磷酸盐，将培养基成分沉淀下来
(2)冰冻保存培养液
建议解决方法
(1)用去离子水反复冲洗玻璃器皿，然后灭菌。
(2)将培养液加热到37℃，摇动使其溶解如沉淀仍然存在，丢弃培养液。
问题3：培养液出现沉淀，同时ph发生变化
可能原因
细菌或真菌污染
建议解决方法
丢弃培养物，或用抗生素除菌。
问题4：培养细胞不贴壁
可能原因
(1)*消化过度
(2)支原体污染
(3)培养瓶瓶底不干净
(4)培养液ph值过碱(nahco3分解)
(5)消化液或培养液配制错误、过期储存、储存不当
(6)细胞老化(如传代前细胞已汇合导致失去贴附性)
(7)接种细胞起始浓度太低或太高
建议解决方法
(1)缩短*消化时间或降低*浓度。
(2)分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。
(3)注意刷洗，或换用一次性塑料培养瓶
(4)使用无菌醋酸溶液调整ph值或充入无菌co2(将培养液敞口放入培养箱也可)
(5)重新配置消化液或培养液
(6)启用新的保种细胞
(7)调节*接种细胞浓度
问题5：悬浮细胞成簇
可能原因
(1)培养液中含钙、镁离子
(2)支原体污染
(3)蛋白酶过度消化使得细胞裂解释
(4)dna污染
建议解决方法
(1)用无钙镁*洗涤细胞，轻轻吹吸细胞获得单细胞悬液。
(2)分离培养物，检测支原体。如发现支原体污染，丢弃培养物。
(3)用dnase i处理细胞。
问题6：原代细胞培养物污染
可能原因
原代培养组织在进入培养前已污染
建议解决方法
培养前用含高浓度抗生素的*反复冲洗组织。
问题7：培养细胞生长减慢
可能原因
(1)由于更换不同培养液或血清
(2)培养液中一些细胞生长必需成分如*或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏。
(3)培养物中有少量细菌或真菌污染
(4)试剂保存不当
(5)接种细胞起始浓度太低
(6)细胞已老化
(7)支原体污染
建议解决方法
(1)比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验。让细胞逐渐适应新培养液。
(2)换入新鲜配制培养液，或补加*及生长因子。
(3)用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物。或用抗生素除菌。
(4)血清需保存在-5℃到-20℃。培养液需在2-8℃避光保存。含血清*培养液在2-8℃保存，并在2周内用完。
(5)增加接种细胞起始浓度。
(6)换用新的保种细胞。
(7)分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。
问题8：培养细胞死亡
可能原因
(1)培养箱内无co2
(2)培养箱内温度波动太大
(3)细胞冻存或复苏过程中损伤
(4)培养液渗透压不正确
(5)培养液种有毒代谢产物堆积
(6)更多原因参考问题4和问题7
建议解决方法
(1)检测培养箱内co2
(2)检查培养箱内温度
(3)取新的保存细胞种
(4)检测培养液渗透压。注意：大多数哺乳动物细胞能耐受渗透压为260– 350 mosm/kg。加入额外试剂如hepes或药物都有可能影响培养液渗透压。
(5)换入新鲜培养液
(6)更多解决方法参考问题4和问题7