正常肺细胞培养操作方法
取出小鼠细胞系正常肺组织, 在预冷的pbs液中尽量除去气管、支气管、血管组织, 将小鼠肺组织上面的血污用pbs清洗后, 剪成1 mm3 小块, 用0.25%的胰酶溶液清洗一次, 继续用 0.25%的胰酶在37 °c下搅动消化10~20 min。之后加入等量的含有10% fbs的dmem培养基终止消化, 200 目筛网过滤后, 1 500 r/min低温离心5 min, 去上清, 再将沉淀加入0.1% i型胶原酶在37 °c下消化10~20 min,加入含有10% fbs的dmem培养基终止消化, 1 000 r/min离心5 min。将细胞系悬液接种于培养瓶中, 置37 °c、5% co2的培养箱中培育40 min, 此时贴壁的为成纤维细胞, 悬浮的多数为肺泡ii型上皮细胞和其他杂细胞。
将培养液吸出置于另一瓶中, 继续在培养箱中培育 40 min, 反复2~3次, z后吸出培养液, 800 r/min离心 5 min, 去上清, 用含10% fbs的dmem培养基重悬沉淀细胞。接种于培养瓶置37 °c、5% co2的培养箱中培育, 留少量细胞做免疫化学实验, 用鼠抗sp-c 为一抗, alexa fluor 594标记的山羊抗小鼠igg为二抗, 确认为肺泡ii型上皮细胞系后备用。