牛腺病毒3型探针法荧光定量pcr试剂盒实验说明：
需要自备的器材：
1．方法仪器：分析天平、离心机、荧光 pcr 扩增仪、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器（2 µl、20
µl、200 µl、1000 µl）。
2．耗材：荧光 pcr 专用反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 ml 经焦碳酸二乙酯（depc）水
处理的灭菌离心管、吸头（10 µl、200 µl、1000 µl）、灭菌双蒸水。
反应五要素：
参加pcr反应的物质主要有五种即引物、酶、dntp、模板和mg2+
引物：引物是pcr特异性反应的关键，pcr 产物的特异性取决于引物与模板dna互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板dna序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用pcr就可将模板dna在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：g+c含量以40-60%为宜，g+c太少扩增效果不佳，g+c过多易出现非特异条带。atgc*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致pcr失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。
注意事项：
1、使用本试剂前请仔细阅读本说明书全文。
2 、操作时应尽量少说话，因口腔中也含有支原体，可能引起样品污染，而造成假阳性；整个检测过程中，反应体系的配制、样本处理及加样、pcr扩增应分区域进行，以避免交叉污染。
3 、实验时，试剂盒组分中的试剂使用前应充分融化并混匀（混匀时禁止激烈振荡，只需要进行上下倒置多次进行混匀）。
4、 反应管中加好所有的试剂后，应尽快上pcr仪进行扩增，以免形成过多的二聚体。
5、细胞培养物中含有青霉素和链霉素等抗生物素不会影响本品的检测结果。如果用户需要进一步提高检测。