人elisa定量检测试剂盒固体样本处理原则操作流程

发布时间:2024-03-14
人elisa定量检测试剂盒固体样本处理原则操作流程
1、组织标本:切割标本后,称取1g组织,加入9g的ph7.2-7.4左右的pbs,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保存中如有沉淀形成,应再次离心。对于植物组织,不好匀浆的话,就在液氮中充分研磨;
2、大鼠elisa检测试剂盒细胞内蛋白样本
许多待测蛋白不是蛋白,而是存在于细胞内的蛋白,这个时候,要先收集细胞,洗涤干净,再破碎细胞,离心取上清。
大鼠elisa检测试剂盒操作流程如下:
(1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入pbs50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人aif抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的hrp-标记的山羊抗兔抗体工作液100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加tmb显色液100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl2mol/lh2so4终止反应。
(12)分别测450nm吸光值w1和630nm吸光值w2,zui终测得的od值为两者之差(w1-w2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(s)和阴性对照(n)的od值后,计算s/n值。s/n≥2.1为阳性判定标准。
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