蜥蜴17羟孕酮（17-ohp）elisa试剂盒使用方法:
测定法的灵敏度来自作为报告的酶。酶是一种有机催化剂,很少量的酶即可诱导大量的催化反应,产生可供观察的显色反应现象。因此该体系常被称为酶放大体系。
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 24μg/ml 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
12μg/ml 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
6μg/ml 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
3μg/ml 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
1.5μg/ml 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。|
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂a50μl,再加入显色剂b50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(od值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
细菌冻存液50ml
pucm-t载体20次
pgl6(报告基因质粒)1μg
pgl6-ta(报告基因质粒)1μg
pgl6-mir(报告基因质粒)1μg
pap1-luc(报告基因质粒)1μg
pap1-ta-luc(报告基因质粒)1μg
pare-luc(报告基因质粒)1μg
pgre-luc(报告基因质粒)1μg
pisre-ta-luc(报告基因质粒)1μg
pmyc-ta-luc(报告基因质粒)1μg
pnfκb-luc(报告基因质粒)1μg
pnfκb-ta-luc(报告基因质粒)1μg
pp53-ta-luc(报告基因质粒)1μg
prb-ta-luc(报告基因质粒)1μg
pstat3-ta-luc(报告基因质粒)1μg
paat-promoter-luc(报告基因质粒)1μg
pil-6-promoter-luc(报告基因质粒)1μg
ptnf-α-promoter-luc(报告基因质粒)1μg
ptnf-α-promoter-ta-luc(报告基因质粒)1μg
pcmv-blank1μg
pcmv-c-bfp(蓝色荧光蛋白)1μg
pcmv-c-cfp(青色荧光蛋白)1μg
pcmv-c-dsred(红色荧光蛋白)1μg