非洲猪瘟病毒荧光pcr检测试剂盒[风途配件提供]ft-zwsj2frikansk svinpestvirus fluorescerande pcr-detektionssats在猪的方面,养猪人在引种时一定要注意隔离和检测,且平时要做好相关的排查工作,如果发现猪只出现体表发绀、耳朵或体表出现紫斑、毛孔出血、厌食、腹泻等症状时,要提高警惕,好是采样送到相关的非洲猪瘟检测实验室进行检测。
【产品名称】
通用名称:病毒*
英文名称:extraction kit for virus dna
【预期用途】
本试剂盒主要用于疑似病毒等病原感染抗凝血、血淸、拭子、组织、饲料及环境中的病毒dna的提取,纯化的核酸可适用于各种常规操作及pcr试验。
【试剂盒组分】
i、试剂盒组成及贮藏条件
名称
20t
50 t
1、吸附柱
20个
50个
2、收集管
20个
50个
3、裂解液
5ml
11 ml
4、洗液i
13ml
32 ml
5,洗液ii
13ml
32 ml
6.洗脱液
1.2 ml
3 ml
2、 保存条件及有效期:室温下保存,有效期12个月.
3、 需自备材料:无水乙醇、1.5 ml无菌离心管、1.5 ml无菌离心管(长臂型)、生理盐水、研钵、无菌
1ml, 2ooul、10ul枪头、记号笔等。
【操作步骤】
一、样品制备
1、 血液样品:抗凝血样品置离心管中,8000转/分钟离心2分钟,取上层血浆;非抗凝血样品置离心 管中,待凝固后,8000转/分钟离心2分钟,取上层血清,置于灭菌离心管中,编号待检。
2、 组织样品:采集脾脏、肝脏、淋巴结、扁桃体等病变组织样品0.1g.组织匀浆器或研钵中充分匀浆或研磨,加入1 ml生理盐水混匀,8000转/分钟离心2分钟,取上清于灭菌离心骨中,编号待检。
3、 口腔液:进食前用拭子/口腔液采集袋或自制棉线绑纱布团吸引动物咀嚼,收集口腔液大于 500ul, 8000转/分钟离心2分钟,取上清于灭菌离心管中,编号待检。
4、 饲料:取适量研磨后的饲料(约0.2g),放入含1 ml生理盐水或pbs(ph为7.4)缓冲液的2 ml ep 管屮,振荡混匀,8000转/分钟离心2分钟,取上清于灭菌离心管中,编号待检.
5、 灰尘:用无菌棉签蘸取适量环境表面上的灰尘,放入含1 ml生理盐水或pbs(ph为7.4)缓冲液的2 ml ep管中,振荡混匀,8000转/分钟离心2分钟,取上清于灭菌离心管中,编号待检。
二、dna的提取
1、取裂解液200ul加入无核酸酶1.5 ml离心曾屮,分别加入血浆/血清/组织液等样品液200ul. 震荡混匀10秒或颠倒混匀10次,室温放置5分钟(如果室内温度较低时.需放置25c水浴温育),再加入200ul无水乙醇,颠倒混匀10秒;若样品浑浊则先12000转/分钟离心1分钟处理,取上清液,以避免堵塞柱子;
2、 将液体转入套有收集管的吸附柱中, 12000rpm离心1分钟:
3、 弃收集管液体,向吸附柱中加600ul洗液i , 12000 rpm离心1分钟;
4、 弃收集管液体,向吸附柱中加600ul洗液ii, 12000 rpm离心i分钟;
5、 弃收集管液体,12000 rpm离心2分钟,以*去除残留洗液;
6、将吸附柱转入新的无核酸酸1.5mlep管(长臂型)中,向柱滴加50 ul洗脱液,静置1分钟, 12000 rpm离心1分钟,ep管中液体即为病毒dna。
【注意事项】
1、 实验前诺仔细阅读本试剂盒说明书,严格按照操作步骤执行.在操作过程中对时间、试剂体积等 粘确控制可以获得好的结果。
2, 样本应新鲜采集使用,或低温运输储存;
3, 样本具有潜在感染风险,核酸的提取应在核酸提取实验室的生物安全柜中进行。
4、 核酸提取冇关耗材确保高温灭菌,提取后核酸尽快进入下一步试验或冷冻保存待用。
5, 试剂使用前应混合均匀,试剂具有一定腐蚀性,使用时请戴手套、做好防护。
6. 低温下裂解液出现结晶数属正常现象,可在60°c水浴加热助溶后使用。
7、 实验产生的废弃物应及时收集,远离pcr实验室进行无害化处理。