茶树新梢cdna文库的构建和ests测序成功率初步分析

发布时间:2024-02-19
报道了国内第一个茶树cdna文库的构建及其est测序成功率分析。以trizol一步法从龙井43春茶新梢中提取总rna,分离纯化富含poly(a)的mrna,ld-pcr反转录合成双链cdna,以入tripex2为载体,构建了龙井43新梢cdna文库。以xl1-blue为受体菌测定原始文库的滴度为6.8×l0^5 pfu/ml,总克隆数为3.5×l0^5个,重组率为98.05%,扩增后文库总滴度为7.2×l0^9pfu/ml。对随机挑取的噬菌斑进行pcr鉴定,表明插入片段大多分布在0.5.2.0kb之间,绝大部分在1.0.1.5kb左右。文库质量鉴定结果表明。构建的茶树新梢cdna文库具有较好的库容量、较高的重组率以及较大的插入片段。对4320个克隆的序列测定表明,获得有用序列2963个,测序成功率为68.5%,剔除短序列后。首批共获得1687个茶树ests。完成机构:[1]中国农业科学院茶叶研究所,浙江杭州3lo008 [2]中国农业科学院研究生院,北京lo008l [3]浙江大学分析测试中心生物大分子研究室,浙江杭州3l0029
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