1 材料
1.1 细胞
大鼠心肌细胞株 h9c2（购买于中国医学科学院协和医学院基础医学细胞中心）。
1.2 药品与试剂
附子样品共 4 批，购自四川江油中坝附子科技发展有限公司，产地分别为云南（批号：hspyn）、陕西汉中（批号：hspsxhz）、四川江油（批号：hspscjy 和 hspscjy1）。新（中国食品药品检定研究院，批号：110799-201608）；dmem 培养基（美国 hyclone 公司，批号：ae）；胎牛血清（美国 gibco 公司，批号 a10112-2770）；0.25 % 胰 蛋白酶（美国hyclone 公司，批号：mhe86395）；青、*（美国 hyclone 公 司，批 号：ab，j170012）；cck-8（碧云天生物 技 术有限责任公司，批号：）；pbs（北京益美源生物科技有限责任公司，）。
1.3 仪器
mco-15a 型 co2 培养箱（日本三洋电机国际贸易有限公司）；yuetan 型超净工作台（北京半导体设备一厂）；dt5-6a 型台式离心机（北京时代北利离心机有限公司）；axioobserver 倒置显微镜（德国 zeiss 公司）；multiskan fc 型酶标仪（美国thermo 公司）；me104e 型电子分析天平（瑞士梅特勒 - 托利多公司）；其林贝尔ql-901 型涡旋仪（海门市其林贝尔仪器制造有限公司）；96 孔细胞培养板及培养瓶（美国 corning 公司）
2 方法
附子水提物由中国中药有限公司制备，制备方法如下：分别称取黑顺片 200 g，浸泡 30 min，煎煮2 次，第 1 次加 9 倍量水，煎煮 30 min，第 2 次加 7倍量水，煎煮 25 min，200 目筛过滤，65℃减压浓缩，测定浓缩液密度及干膏得率，冷冻干燥制备成冻干粉备用。4 个批次（批号：hspyn、hspsxhz、hspscjy、hspscjy1）的附子水提物的干膏得率分别为 21.42%、9.85%、8.79% 和 15.26%。附子水提物：精密称取各批号附子水提物冻干粉，加入 dmem *培养基溶解。使用 0.22μm滤膜过滤杂质，配制为 0.25 mg·ml-1 附子水提物母液，再用 dmem *培养基稀释至相应工作浓度，现用现配。新：精密称取新粉末，加入去离子水溶解，使用 0.22μm 滤膜过滤杂质，配制为 18 mg·ml-1 母液。冻存于 -20℃，使用时加入 dmem *培养基稀释至相应工作浓度，现用现配。h9c2 细胞培养于 dmem 培养基（含 10 % 胎牛血清，100 u·ml-1 青、*，4 mm l- *）中，置于 37℃，5%co2 及饱和湿度的培养箱中培养。加入 1 ml 0.25% *按照 1：3 比例传代培养。取对数生长期细胞进行后续实验。
3 结果
结果显示，各密度下 h9c2 细胞在 0 ～ 48 h 为增殖期，48 ～ 60 h 到达平台期，60 ～72 h 进入衰亡期。当细胞密度为 2×105/ml 时，细胞生长过快，不利于下一步实验。故选用 0.5×10/ml 或1×105/ml 密度进行下一步实验。预实验结果显示附子水提物溶解浓度为250 μg·ml-1，因而选择给药浓度 125 μg·ml-1作为药物测试浓度；新作为阳性对照药，浓度选择为 100 μg·ml-1。结果显 示，当细胞密度为 0.5×105/ml，作用时间为 12 h 时，附子水提物和新对细胞增殖抑制作用较强，且作用稳定，rsd<15%。故选用 0.5×105/ml，药物作用 12 h 进行后续实验。
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