实时聚合酶链式反应（real-time pcr，rt-pcr）是一种高效、灵敏且广泛应用于分子生物学和医学研究的技术。它结合了传统pcr技术和荧光探针的使用，使我们能够实时监测pcr反应过程中目标dna或rna的扩增量，从而可以准确快速地定量分析样本中的特定分子。
rt-pcr的工作原理非常简单，它包括三个主要步骤：逆转录、pcr扩增和荧光检测。
首先，通过逆转录酶（reverse transcriptase）的作用，将rna逆转录成其对应的cdna（复制的dna）。这一步允许我们将rna样本转化为dna，从而方便后续的pcr扩增分析。
接下来，将逆转录后得到的cdna用作pcr的模板。通过加入特定的引物（primers）和荧光探针（例如taqman探针或sybr green探针），我们可以选择性地扩增和检测感兴趣的目标序列。
在pcr反应过程中，荧光探针与pcr产物结合，并释放出荧光信号，这个信号的强度与目标序列的起始数量成正比。利用实时pcr仪器，我们可以实时监测这些荧光信号的累积，从而获得pcr反应的实时扩增曲线。通过分析扩增曲线，我们可以确定样本中目标分子的起始数量，并进一步比较不同样本之间的相对表达水平。
rt-pcr在许多研究领域得到了广泛应用：
基因表达分析：rt-pcr可用于研究基因在不同组织、细胞类型或治疗条件下的表达水平。这有助于了解基因在生理和病理过程中的功能和调控机制。
病毒检测：rt-pcr是许多病毒检测的主要方法，包括感病毒、hiv等。它可以快速、准确地检测病毒的存在，并用于临床诊断和流行病学研究。
微生物学研究：rt-pcr可用于检测和定量微生物的存在，例如细菌、真菌和寄生虫等。这对于了解微生物的种类和数量在感染和疾病中的作用至关重要。
癌症诊断：rt-pcr在癌症诊断中也有广泛应用。通过检测肿瘤标志物的表达水平，可以帮助早期发现癌症并监测治疗效果。
总结起来，实时聚合酶链式反应（rt-pcr）是一种高效、灵敏且广泛应用的分子生物学技术。它在基因表达分析、病毒检测、微生物学研究和癌症诊断等领域发挥着重要作用。随着技术的不断发展，rt-pcr在医学和生物学研究中将继续扮演关键的角色，并为科学家们提供强大的工具来深入研究和理解生命的奥秘。
在进行分子实验前，需要对实验环境进行清洁。在pcr实验室中，dna污染很难清除。即使只有一个污染的dna分子被检测到，也会使整个pcr检测过程出现误差。为确保pcr试验数据准确，预防dna或rna交叉污染，pcr实验室大多会常备dna/rna污染清除剂。
祛除dna污染喷雾剂（实验环境用）——pcr-clean，可有效地降解大多数表面上（轻质金属或有色金属除外）的扩增子，质粒或基因组dna和rna。该产品还能有效地去除dna酶和rna酶。