il-8是一种分子量为8～10kd的多肽，对嗜中性粒细胞，t淋巴细胞、嗜硷性粒细胞具有趋化作用，并可激活嗜中性粒细胞，是一种重要的炎症介质。在严重感染病人的血清中、炎症局部渗出液中都可检测到高水平的il-8。此外，近年来的研究表明，il-8可能与各种组织缺血后再灌注损伤的发生有关。有关科研人员采用两株自制的单克隆抗体建立了夹心法elisa用于检测il-8，敏感性可达156pg/ml。
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il-8是一种分子量为8～10kd的多肽，对嗜中性粒细胞，t淋巴细胞、嗜硷性粒细胞具有趋化作用，并可激活嗜中性粒细胞，是一种重要的炎症介质。在严重感染病人的血清中、炎症局部渗出液中都可检测到高水平的il-8。此外，近年来的研究表明，il-8可能与各种组织缺血后再灌注损伤的发生有关。我们采用两株自制的单克隆抗体建立了夹心法elisa用于检测il-8，敏感性可达156pg/ml，操作简单，重复性良好，可用于il-8的基础和临床研究。
一、原理：采用两株识别不同表位的抗il-8单克隆抗体，其中一株(4d7)作为包被抗体，以识别和结合待检标本中的il-8,另一株作为酶标抗体，与结合于包被抗体的il-8的另一个表位结合并催化底物显色。
二、试剂器材
1. 试剂盒提供包被抗体、酶标抗体、标准品，底物(abts)、96孔elisa板。
2. 包被缓冲液、pbs、底物缓冲液配制同常规elisa法。
三、操作步骤：
1. 包被：ph9.5 碳酸盐缓液稀释4d7单克隆抗体粗提γ球蛋白至1μg/ml,加入96孔板,100μl/孔，放4℃,36小时。
2. 封闭：0.1%吐温pbs(buffer a)冲洗96孔板三次，加3%bsa buffer a(buffer b)200μl/孔，放37℃,1小时。
3. 加待检样品：buffer a 冲洗96孔板三次，加待检样品及buffer b 稀释的标准品100μl/孔，放37℃,3小时。
4. 加酶标抗体：buffer a冲洗96孔板五次,3%peg buffer a稀释酶标抗体至1∶800，加入96孔板，100μl/孔，放37℃,1小时。
5. 显色：buffer a冲洗96孔板五次，ph5.4柠檬酸缓冲液溶解底物(abts),0.2mg/ml,加3%h2o2,2μl/ml，加入96孔板，100μ/孔，室温下或37℃显色。
四、注意事项：
1. 待检标本如为血清，应采用一次性容器，血液采集后尽快(6小时以内)分离血清。
2. 封闭液或抗体稀释液应新鲜配制或冻存。