单克隆抗体技术原理及基本流程：
原理：
哺乳类细胞dna合成可分为两条途径，①从头(de novo)合成途径，利用磷酸核糖焦磷酸和尿嘧啶，可被氨基蝶呤(a)阻断；②补救(salvag-e)合成途径，在次黄piaoling磷酸核糖转化酶( hgprt)存在下利用次黄piaoling(h)和胸腺嘧啶(t)。
单克隆抗体技术的流程为：脾细胞和骨髓瘤细胞在聚乙二醇(peg)作用下发生细胞融合；加入hat选择培养基(含h、a和t)后，未融合的骨髓瘤细胞因其从头合成途径被氨基蝶呤阻断，而又缺乏hgprt不能利用补救途径合成dna，从而死亡；未融合的脾细胞难以在体外培养而死亡；融合细胞因从脾细胞获得hgprt，故可在hat选择培养基中存活和增殖。
基本流程：
一、动物免疫
(1) 抗原制备。
(2) 免疫动物的选择。
(3) 免疫程序的确定。
二、细胞融合
首先制备细胞培养基、 氨基喋呤（a）贮存液、次黄piaoling和胸腺嘧啶核苷（ht）贮存液等各种细胞生长所需的营养物质。然后制备髓瘤细胞和脾淋巴细胞，之后进行细胞融合。在细胞融合后选择性培养过程中，由于大量骨髓瘤细胞和脾细胞相继死亡，此时单个或少数分散的杂交瘤细胞多半不易存活，通常必须加入其他活细胞使之繁殖，这 种被加入的活细胞称为饲养细胞。饲养细胞促进其他细胞增殖的机制尚不明了，一般认为它们可能释放非种属特异性的生长刺激因子，为杂交瘤细胞提供必要的生长 条件；也可能是为了满足新生杂交瘤细胞对细胞密度的依赖性。
三、细胞筛选
杂交瘤细胞在融合后2周左右即可筛选，即把分泌所需抗体的杂交瘤孔从众多的孔中选出来，通常也称为抗体检测。抗体检测的方法很多，通常根据所研究的抗原和 实验室的条件而定。但作为杂交瘤筛选的抗体检测方法必须具有快速、准备、简便，便于一次处理大量样品等特点。因为往往有几百个样品需要在短短几个小时就报 告结果，以便决定杂交瘤细胞的取舍。所以选用抗体检测方法的原则是快速、敏感、特异、可靠、花费小和节省人力。一般说来，在融合之前就必须建立好抗体检测 方法，并克服可能存在的问题。另一个重要问题是抗体检测方法所需要的“动力学范围”，即检出背景以上的最qiang与最弱信号之比，依所用的检测抗原是否纯净而 定。如杂交瘤抗体是针对纯化的蛋白质抗原的，抗原参与反应，一个阳性/阴性判别系统就够了。另一方面，如果杂交瘤抗体是针对细胞表面微量的蛋白 抗原，检测系统可能需要能测出微弱信号，则动力学范围至少应为10：1，最hao为100：1。另外，检测方法的选择还受所需杂交瘤抗体的类型和预定的用途的 影响。结合补体的抗体可以用基于细胞毒性反应的检测方法来选出。如需结合a蛋白的杂交瘤抗体，就要用结合蛋白a的检测方法。
四、克隆化
从原始孔中得到的阳性杂交瘤细胞，可能来源于二个或多个杂交瘤细胞，因此它们所分泌的抗体是不同质的。为了得到wanquan同质的单克隆抗体，必须对杂交瘤细胞进 行克隆化。另一方面，杂交瘤细胞培养的初期是不稳定的，有的细胞丢失部分染色体，可能丧失产生抗体的能力。为了除去这部分已不再分泌抗体的细胞，得到分泌 抗体稳定的单克隆杂交瘤细胞系（又称亚克隆），也需要克隆化。另外，长期液氮冻存的杂交瘤细胞，复苏后其分泌抗体的功能仍有可能丢失，因此也应作克隆化， 以检测抗体分泌情况。通常在得到针对预定抗原的杂交瘤以后需连续进行2-3次克隆化，有时还需进行多次。所谓克隆化是指使单个细胞无性繁殖而获得该细胞团 体的整个培养过程。克隆化的方法很多，如有限稀释法、软琼脂法、单细胞显微操作法、单克隆细胞集团显微操作法和荧光激活细胞分类仪（facs）分离法。
五、冻存与复苏
(1) 杂交瘤细胞的冻存。
(2)杂交瘤细胞的复苏。
六、鉴定单抗特性
(1) 单克隆性的确定 包括杂交瘤细胞的染色体分析、单抗免疫球蛋白重链和轻链类型的鉴定和单抗纯度鉴定等。
(2)单抗理化特性的鉴定。从实用意义上说，单抗对温度和ph变化的敏感性以及单抗的亲合力都是理化特性鉴定的主要项目，它们可为单抗的使用和保存提供重要依据。
(3)单抗与相应抗原的反应性测定。单抗与相应抗原的反应性决定于它所识别的抗原表位，确定单抗针对的表位在抗原结构上的位置，是单抗特性鉴定的关键环节，同时，进一步分析这类表位的差别， 可正确评价单抗的特异性和交叉反应性。
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