实验方法原理 用培养液制备细胞悬液，将悬液注入单元的各小室内。使长边朝下，放置。将单元旋转 90°，放平后用 co2 充气。然后封闭，进行培养。
实验材料 单层细胞0.25%天然*d-pbsa
试剂、试剂盒 生长培养液
仪器、耗材 nunc细胞工厂硅酮管和连接器*或电子细胞计数器和计数用液体
实验步骤
1. 用*消化后，将细胞悬浮，计数细胞，用 2 l 培养液将悬液稀释至细胞密度为 2×104 个/ml。
2. 使小室长边朝下，放置，将培养液供应管与 luer 连接管相接，再通过供应管与底孔连通。
3. 经供应管加入细胞和培养液。所有培养小室内的液体将达到相同水平。
4. 按单层细胞平面将小室转动 90°，使单元的短边朝下，放置，使进孔和供应管朝上。
5. 在 luer 连接管处，中断供应管与培养液储存器的连接。
6. 与细胞单层平面垂直，将培养小室转动 90°，以底部放平，使培养面呈水平位。
7. 用 5% co2 空气向单元充气 5 min，然后夹住供应管和出口。如果需要，可连续充气。
8. 倒掉供应管和出口内的培养液，然后将单元移入培养箱。
9. 更换培养液（或收集培养液）时，按步骤 6 的相反程序操作。除去输入管上的滤器，然后按步骤 4 相反程序操作。
10. 擦洗 luer 连接管，松开夹具，使培养液流出。
11. 按步骤 2~8 更换培养液。
12. 收集细胞。
(a)按步骤 9 和步骤 10 除去培养液。
(b)加入 500 ml d-pbsa，然后除去。
(c)加入 4°c 的 500 ml *，30 s 后除去。
(d)用剩余的*将细胞消化 15 min。
(e)加入培养液，摇动培养小室，使细胞悬浮。
(f)按步骤 9 和步骤 10 取出含细胞的培养液。
13. 残留细胞可用于接种下一批细胞，虽然这种方法难以控制接种密度。是将培养小室丢弃，用新的小室重新开始培养。