实时荧光PCR试剂盒使用及效果

发布时间:2024-07-24
实时荧光pcr试剂盒使用及效果:
pcr反应特点
() 特异性强
pcr反应的特异性决定因素为:
①引物与模板dna特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③taq dna聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及taq dna聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
pcr产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=0-2g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=0-6g)水平。能从00万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,pcr的灵敏度可达3个rfu(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
pcr反应用耐高温的taq dna聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在dna扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,dna 粗制品及总rna均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活pcr技术概论。
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