产品概述：
biozellen细胞3d培养基质胶套装
biozellen细胞3d培养基质胶套装
catalog no. b-p-00002-2、b-p-00002-4、b-p-00002-10
specification 2ml-kit、4ml-kit 、10ml-kit
storage 4℃保存、 保存两年
biozellen®基质胶特点
1、100%植物源材料，无任何动物成分；
2、胺基酸序列100%人源化 ；
3、可调控基质胶硬度进行多种细胞培养；
4、3d细胞/类器官培养种类数量范围更广；
5、无人畜共通病原菌或毒素风险；
6、为适用于医疗生物原料；
7、高活性、高纯度、可融化；
8、4度运输、4度保存；
9、2年保存时间；
10、3d培养结束后基质胶可以温和融化，并保留3d细胞/类器官结构完整性；
一、产品描述
biozellen®3d细胞培养基质胶套装包含整套基质胶、胶体固定液、胶体溶解液，可应用到3d细胞培养与微环境应用等；本试剂盒操作便利且可调控基质胶硬度进行多种细胞培养测试；植物胶体可快速形成水凝胶， 请操作详细阅读此使用指南。
（biozellen®3d细胞培养基质胶套装为植物来源，无动物成分）
二、应用
•3d细胞球体培养试验
•小鼠皮下成瘤
•细胞迁移实验
•适合用于3d细胞药物筛检平台
•细胞生长和分化
•代谢/毒理学研究
三、样本类型
•肿瘤细胞系、
四、试剂盒组分
五、使用步骤：
a、试剂制备
a基质胶：将a基质胶溶于37℃水浴槽回温10分钟， 确认融解.
c缓冲溶液(1x)制备：使用将10x c缓冲溶液用冰的无细胞培养液(例如： 无血清dmem、opt-mem) 制备成 1x c 缓冲溶液。(不要用 pbs 稀释 c 缓冲液) .
d 缓冲溶液(1x)制备: 使用用冷的 1x pbs 稀释 10x d 缓冲溶液至 1x d 缓冲溶液.
b、biozellen®3d细胞培养基质胶的制备
全部步骤需要在无菌环境内操作，操作步骤如下：
1. 将24孔培养板放置于冰上预冷半小时。
2. 细胞计数后取 2×105~2×107 细胞与 0.5 毫升 37℃ 细胞培养基均匀混合，并与0.5毫升37℃ a胶按照 1:1 等比例均匀混合，终细胞密度1*105~1*107cells/ml。
注：请选择适当的培养溶液与条件进行试验。
3.取 20-40 微升步骤 2的混合液滴于 步骤 1 预冷的培养板上，胶体将于 5 分钟内成胶。 注: 测试胶体是否成胶，可用微量吸管尖温和的触碰胶体表面进行确认。
4.待胶体成胶后，添加1毫升冰的1x c缓冲溶液，并盖过步骤3 的胶溶液，固定 15 分钟。
5.待15分钟固定后，小心的吸取 c 缓冲溶液并置换为适合此细胞生长之培养基溶液。
6将含有细胞的胶于37°c 二氧化碳培养箱内进行7~14天的培养，并观察细胞球体的形成，按正常培养基更换频率进行更换操作。
c、溶胶与收集细胞球体准备程序
小心的将培养基吸取移除，并用1x pbs进行清洗。
小心的将 1x pbs 吸取移除，并添加 1 毫升冰的d缓冲溶液，盖过胶滴于室温反应 5分钟。
温和的用1毫升移液管吸取，直到胶滴溶解。
将含有细胞球体的溶液吸入1.5 毫升离心管，用1000 rpm的转速离心10分钟，移除上清液体并收集细胞球体做分析。
d、收集单颗细胞准备程序
在分离单细胞，先按上述溶胶与收集细胞球体准备程序进行操作
1. 添加trypsin-edta并与收集的细胞球体于37°c混合反应。
2. 用1毫升移液管混合，直到细胞体分解。
3. 待细胞球体分解，加入3倍体积的1x pbs，并用1000转的转速进行离心10分钟，并移除上清液体收集沉淀的单细胞做分析。
e、细胞迁移实验准备程序
1. 准备transwell装置及无血清dmem细胞培养液 (用于稀释a胶)。
2. a胶 (2x) (货号:b-p-00002-a) 置于37 ℃水浴槽回温10分钟，确认融解。
3. 用无血清dmem细胞培养液将a胶 (2x)稀释50倍。
4. 根据transwell上室底部面积加入100-120 ul/cm2稀释后的a 胶稀释液到transwell上室中。
5. 将步骤4在4 ℃冰箱孵育30分钟。
6. 将多余的稀释液吸出，并在transwell上室中加入无血清的癌细胞系细胞悬浮液使细胞浓度约7.5 x 104 cells/well.。
7. 在transwell下室中加入含10 %血清的细胞培养液做为chemoattractant，吸引癌细胞系进行迁移。
f、小鼠皮下成瘤实验准备程序
1. 将 a胶 (2x) (货号:b-p-00002-a) 置于37 ℃水浴槽回温10分钟，确认融解。
2. 将c缓冲溶液(10x) 货号:b-p-00002-c)与冰的无血清细胞培养液 (例如: 无血清dmem或内含vegf、heparin的无血清dmem) 按1:4比例均勻混合配置。(例如:1 ml c缓冲溶液(10x) 與 4 ml 无血清dmem混合，不可用pbs稀释)
3. 将 a胶 (2x) 与约2*106 cells/ml的癌细胞系悬浮液按1:1等比例均匀混合配置，癌细胞系悬浮液终浓度约为106 cells/ml。
4. 选用21-25 g的针头 (避免破坏细胞)，抽取0.2-0.3 ml 预冷稀释后的c缓冲溶液。(c缓冲溶液用于a胶成胶反应)
5. 使用步骤4的同一支针管，再抽取0.1-0.7 ml含细胞的a胶混合液，在冰上孵育五分钟。
6. 以皮下注射方式注射0.3-1.0 ml至小鼠。(需一次注射完含c缓冲溶液的a膠混合液)
注1: 注射体积可依不同实验目的做调整，若为血管生成研究注射体积需至少0.5 ml。
注2: 此步骤依实验需求可执行或不执行，若需呈现明显的皮下注射隆起效果，可于注射完毕后，在小鼠注射部位冰敷5-10分钟
，若需呈现明显的皮下注射隆起效果，可于注射完毕后，在小鼠注射部位冰敷5-10分钟。
7. 培养一至三周后可摘取接种的肿瘤组织。
注3: 若为血管生成研究，应注射含vegf及heparin的a胶，以促进血管生成。约三天后，可摘取含有新血管生成的肿瘤组织。