碘化丙啶（pi）兼容于各种细胞标记技术
产品描述：科研试剂，广泛应用于分子生物学，药理学等科研方面，严禁用于人体。核酸荧光染色剂。碘化丙啶（propidium iodide，pi）是一种常用的细胞核荧光染料，作为一种溴化乙锭（eb）的类似物，能够嵌入碱基之间实现与dna结合。这种结合没有或者几乎无序列倾向性，大约每4-5个dna碱基对结合一个染料。pi也能与rna结合，需要用核酸酶处理来区分dna和rna染色。水溶液中pi的最大激发/发射波长是493/636nm。一旦与核酸结合，荧光信号明显增强20-30倍，最大激发波长向红色波段迁移~30-40nm，最大发射波长向蓝色波段迁移~15nm，从而使其最大激发/发射波长变为535/617nm。pi的摩尔吸光系数相对比较低，但是其具有足够大的斯托克司频移来同时检测核酸dna和荧光标记抗体，只需要使恰当的滤片。pi适用于荧光显微镜，共聚焦显微镜，流式细胞仪以及荧光计分析。pi不能穿透细胞膜而被排斥在活细胞外，但是可以穿过破损的细胞膜而对核染色。利用这一特性，通常与calcein-am、hoechst 33258或 hoechst 33342等活细胞荧光探针一起使用，同时对活细胞和死细胞染色和鉴定，用于细胞凋亡相关的研究。也可以用作多重荧光染色的复染剂，兼容于各种细胞标记技术，包括直接或者间接的荧光抗体检测，mrna原位杂交，细胞结构特异性的荧光探针检测法以及组织染色。pi的单独染色也可以进行细胞周期的检测。
pi不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色，常被用来与calcein-am，hoechst 33258/33342或fda等荧光化合物一起使用，同时对活细胞和死细胞进行染色和鉴定，用于细胞凋亡相关研究。pi的单独染色可以进行细胞周期的检测。pi适用于荧光显微镜，激光共聚焦显微镜，流式细胞仪及荧光分析仪。
使用方法：
1. 储备液配制：将碘化丙啶粉末充分溶解于去离子水中配制成1mg/ml（1.5mm）溶液，于+4℃避光保存，可稳定保存6个月以上。
2. 使用方法：
2.1贴壁细胞复染步骤（荧光显微镜检测）
1）样本准备：根据自身样本选择合适的步骤固定细胞。pi染色一般在其它染色完成后再进行。pi复染要求细胞经透化处理。
2）rnase酶处理：若样本使用多聚甲醛，甲醛或者戊二醛固定，则需要进行rnase处理。若样本用甲醇/醋酸或者丙酮固定，通常不需要此步操作。
a， 于2×ssc (0.3 m nacl, 0.03 m sodium citrate, ph 7.0)溶液平衡样本；
b， 将本品置于含有100 µg/ml dnase-free rnase的2×ssc溶液中37°c孵育20min；
c， 用2×ssc溶液清洗样本3次，每次1min。
3）复染：
a，于2×ssc (0.3 m nacl, 0.03 m sodium citrate, ph 7.0)溶液平衡样本；
b，直接用2x ssc稀释1mg/ml（1.5 mm）pi储存液 1:3000，得到500 nm的pi工作液。通常添加300µl染液足够用于一个盖玻片细胞制片。染色1-5min。
c，2×ssc清洗几次，流尽多余的缓冲液后，加入抗淬灭剂封片。
d，选择荧光显微镜的合适滤片进行观察。
关键词：荧光显微镜 共聚焦显微镜 流式细胞仪 显微镜 荧光分析仪