高起始量带分子标签的dna-seq分析
thruplex®tag-seq hv
·更可靠的dna-seq分析：文库中整合了离散且均衡的分子标签（umis），提供更可靠的数据表现！
·兼容更高起始量的多种样本：5至200 ng ffpe dna、cfdna起始，30 μl建库体积，无需浓缩样本！
·删繁就简：单管三步操作流程，2 h内完成illumina文库构建！
·一致高效：无畏起始量差异，高实验重复性、更均一的文库覆盖度，高gc含量区域偏差更小！
·更适合于稀有突变分析，减少扩增误差及测序错误！
■ 产品说明
目前，将ngs用于正确检测低频突变的关注度逐渐上升。各领域科研人员正在突破稀有突变检测灵敏度与特异性的瓶颈，而这些问题主要是由样品准备、扩增偏差及测序错误所引起的。而向illumina文库添加*的分子标签（unique molecular identifiers, umis）与*的双端index(unique dual indexes, udis)，能有效改善稀有突变检测的准确性。出于文库制备与测序质量直接相关的考虑，我们特别优化推出了接头上带umis及整合udis的全新产品——thruplex tag-seq hv试剂盒。该产品保留了单管流程、操作简便的特点，支持5至200 ng input dna起始用于稀有变异分析！
正确的样本数据回溯、更小的手动操作误差，科研人员再不用担心珍贵样本损失了！
■ 来自umis的“助攻”
thruplex tag-seq hv在茎环形接头上引入了离散的umis，文库中每个dna分子有144种可能的标签组合，汉明间距超过6，具有高度的差异性。我们特别设计了umi序列，以使序列颜色分布达到平衡，在illumina平台上能获得更好的测序数据。我们也谨慎调整了各umi接头的浓度，以使144种序列组合在各种dna起始量都能均匀展现，减少偏差。
由7位碱基所组成的umis位于reads的开始位置，能够”tag”到dna模板上，用于识别一致序列，减少扩增或者测序错误带来的假阳性突变。
这种特别优化的umis设计，确保了更简便的样本demultiplexing过程，分析更容易！
■ “抓住”游离dna，“揪出”稀有突变
游离dna（cfdna）是由细胞凋亡后所释放，游离于体液中的dna小片段。对cfdna的测序分析具有较大难度，特别是涉及肿瘤学研究中的稀有突变分析时。
takara科学家采用thruplex tag-seq hv对10 ng起始的quan-plex patient-like ctdna标准品（accuref）构建文库，该ctdna(循环肿瘤dna)标准品带有一系列特征化的不同频率（0%，1%，5%）突变位点。文库构建完成后，肿瘤相关的基因采用idt xgen pan cancer panel进行捕获富集。结果显示目标区域的捕获高效可靠，10 ng起始的dna样本约有79%的reads来自或者接近目标区域。
上表数据显示，由坐标法或umis去除重复reads后的目标区域平均覆盖度是相似的，与picard markedduplicates所报道的pcr duplication结果一致。
随后，takara科学家用umis鉴定了ctdna标准品中特定位点的实际突变频率，结果显示，检测到的突变频率分别与预期1%、5%的等位突变频率接近，而阴性对照组没有在位点处检测到任何突变。
如果采用未去重的文件或仅用坐标法去重的文件，会检测出大量的超过0.5%等位基因频率的不一致突变。而umis引入、校正后，相应突变体的数量变少了，结果的正确性进一步提升，显示出umis在降低扩增及测序错误上的重要作用。
更具代表性的是，使用未去重或者仅用坐标法去重的文件分析，在预期的egfr l858r突变附近观察到大量的低频及随机等位基因频率突变。而用umi校正、过滤后的一致性序列reads，清除了假阳性突变，得到了预期的突变分析结果！
订购信息：
品牌 code no. 产品名称 包装量
clontech r400742 thruplex®tag-seq hv 24 rxns
clontech r400743 thruplex®tag-seq hv 96 rxns
clontech r400735 thruplex®tag-seq hv core components 96rxns
clontech r400734 thruplex®tag-seq hv core components 24rxns
clontech r400739 thruplex®hv udi 1-24 24 rxns
clontech r400738 thruplex®hv udi set a 96 rxns
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